更新時間:2021-07-12
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實驗原理:
1:TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。
2:顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關(guān)。
3:用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
4:用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。
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計算方法如下:大鼠催乳素檢測試劑盒
→ 以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD值為縱坐標(普通坐標)。
→ 在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù)。
→ 或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式。
→ 計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
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實驗時注意事項:
1、實驗應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,稀釋過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
2、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,不同批號的試劑不要混用,保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉感染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混合試劑盒里的各種成分及樣品。
6、底物A易揮發(fā),避免長時間打開蓋子,底物B對光敏感,避免長時間暴漏于光下,避免用手接,實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
7、加入試劑的順序一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
8、按照說明書中標明的時間,加液的量及順序進行溫育操作。
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